成功的實驗是個循序漸進(jìn)的過程影響EL ISA實驗結(jié)果的因素有很多只有的掌握了實驗的細(xì)節(jié)才能購做出好的實驗。 您可知您的ELISA試劑盒實驗為什么會失敗?下面酶聯(lián)生物帶大家了解一下。
一、標(biāo)本的影響
溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用E1 ISA法檢測易產(chǎn)生假陽性。可能是溶血血清中含有過氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)在洗滌過程中往往難以洗脫它可使H202釋放出原生態(tài)氧 (0)從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺可溶性的有色物質(zhì)即顯藍(lán)色產(chǎn)生假陽性。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
二、標(biāo)本受細(xì)菌污染
因菌體中可能含有內(nèi)源性辣根過氧化物酶因此 被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本樣 亦可產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測定結(jié)果。
三、標(biāo)本保存不擋
在冰箱中保存過久的標(biāo)本在間接法ELISA測定中會導(dǎo)致本底過深 造成假陽性;為克服 上述干擾ELISA試劑盒測定的血清標(biāo)本宜為新鮮采集;如不能立即測定5d內(nèi)測定的血清標(biāo)本可存放于4°C,1周后測定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存 ;凍存后融解的標(biāo)本 蛋白質(zhì)局部濃縮分布不均 應(yīng)充分混合后再測定但混勻時應(yīng)輕柔不可強(qiáng)烈振蕩。
四、標(biāo)本凝固不全
在工作中有時為了爭取時間快速檢測 常在血液還未開始凝固時即強(qiáng)行離心分離血清使血清中仍殘留部分纖維蛋白原 在EL ISA測定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊易造成假陽性結(jié)果 ;因此血波標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
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以上是酶聯(lián)生物帶您了解ELISA試劑盒實驗失敗的原因，您知道了嗎？
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